β—胡萝卜素与番茄红素提取分离和测定

β—胡萝卜素与番茄红素提取分离和测定

一实验目的 

1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。

 2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf值的 方法。

 二。仪器和试剂 

仪器三角瓶(50m1) 、分液漏斗(150ml) 、蒸馏瓶(50ml)、普通蒸馏装置 (或减压蒸馏装置)、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。试剂 胡萝卜、丙酮、石油醚(bp30~60"C)、 硅胶(层析用，200~300 目)、无水硫酸 钠、石油醚(bp60~90C).丙酮:石油醚(1: 9) (V/V)。

 三、实验方案. 

1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备 将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。称取碎鲜胡萝卜[1] 10g于小研 钵中,研碎。碎胡萝卜移至50mL三角烧瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次, . 再用石油醚(bp30~60C) 萃取固体两次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮 液中。在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液[2]振荡，分去下层， 用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液 (约1h) ,把混合液倒入50mL圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得 固体。在制得的固体物加入3mL石油醚(bp60- 90C)拌硅胶1g,在通风橱内 抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。

2、装柱和分离

 取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。用 镊子取少许脱脂棉[3]放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一 层厚0.Scm的海石砂(或用- -张比柱内径略小的滤纸代替),关闭活塞，向柱内 倒入石油醚(bp60-90C) 至约为柱高的3/4处，打开活塞，控制流出速度为 1滴/s。 通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。用洗耳球轻轻敲打柱身， 使填装紧密。当装填到3/4时，再在上面加一-层0.5cm厚的海石砂，操作时一 直保持_上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。当液面流至离海石砂面 1cm时，立即从玻璃漏斗加入已制备好的含胡萝卜素的黄色硅胶，随后用 0.5ml石油醚洗下管壁的硅胶，如此连续2一 -3 次，直至洗净为止，然后在色谱 柱上装上滴液漏斗，用石油醚(bp60-90C)作洗脱剂进行洗脱，洗1滴/s。 当有一-黄色的谱带分出，待黄色组分绝大部分洗出时，把洗脱剂换成1: 9丙酮 - -石油醚(bp60-90C)混液作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前(这混液 洗脱剂有助于混合物中极性较大的组分移动)，又可分出两个黄色组分。在 45- -90min 内，柱中物料将全部洗脱出来。观察这些物料通过柱子的移动情况。 在三角烧瓶中收集3份洗出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分 析。

3.薄层色谱法

 样品:柱色谱法中洗脱出的份样品液 展开剂: 1: 9丙酮一石油醚溶液 薄层板的制备:取3片载波体，洗净，晾干。

 在50ml烧杯中放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%cmC水溶液8ml,调成均匀的 糊状，将此糊状物倾于.上述洁净的载玻片圣桑，用手将带浆的载玻片在水平的 桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成厚薄均匀，表面光洁的平整 的薄层板，然后放在水平桌面上，在室温放置晾干后放入烘箱中，缓慢升温至 110C，恒温0.5h，取出，稍冷后置干燥器中备用。

       点样:取出上述制好的薄层板，分别在距一-端 点lcm处用铅笔轻轻划- -横线作 为起始线。用毛细管吸取少量样品液，在一 -块板的起点线上点第-一个色带的样 品液，根据柱色谱分离的色带，依次点样，如果样点颜色较浅，可重复点样， 重复点样前必须待前次样点挥干后进行。样点直径不超过2mm。 展开:待样点干燥后，小心地放入已加入展开剂的250ml广口瓶中进行展开。 在瓶的内壁贴- -张高5cm，环绕周长4/5的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容 器内被展开剂蒸气饱和。点样一端浸 入展开剂0.5cm (样点不浸泡在展开剂中)。 盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂 上升的前沿处划一-记号，晾干后，量出展开剂和样点移动的距离，计算Rf值。

四、注意事项

1，本实验采取的工艺不同于其他工艺，体现在原料粉碎时加入了稳定剂(5ml 氨水和35ml乙醇)来防止β一胡萝卜素被氧化，由此可提高提取率。 

2、色谱柱填装紧密与否，对分离效果很有影响。若柱中留有气泡或各部分松紧 不匀(更不能有断层或暗沟)时，会影响渗滤速度和显色的均匀。但如果填装 时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。 3、加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附剂冲起，影响分离效果。

 4、为了保持色谱柱的均- -性，使整个吸附剂浸泡在溶液或溶液中是必要的。否 则当柱中溶液流干时。柱身干裂，影响渗滤和显色的均- -性。

 5、若不用滴液漏斗，也可用每次倒入10ml洗脱剂的方法进行洗脱

 6、载玻片上涂层要均匀，既不应有纹路、带团粒，也不应有能看到玻璃的薄涂 料点。

 7、点样用的毛细管必须专用，不得弄混。

 8、点样时，使毛细管液面刚好接触到薄层(滤纸)既可，均匀点样过重而使薄 层破坏。

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