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配液有技巧,34招教你学会实验室常用贮存液的配制
2022-1-10

配液有技巧,34招教你学会实验室常用贮存液的配制

   

配液有技巧,34招教你学会实验室常用贮存液的配制

古人云:“常在河边走哪有不湿鞋?”一不小心:“哎?那个**溶液怎么配来着?”别担心小析姐整理好各种溶液的配置方法,记得收藏噢。一起来看下吧。

写在前面

1

30%丙烯酰胺溶液

『配制方法』

将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中. 加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml.用0.45μm孔径滤器过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

〖注意〗

丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性. 称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具. 可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作. 因为它还可能会含有少量未聚合材料. 有些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后过滤以纯化之(建议使用Whatman 1号滤纸过滤,鸿跃公司有售). 在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸.

2

40%丙烯酰胺

『配制方法』

把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中. 继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L.

〖注意〗

见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定.

3

放线菌素D溶液

『配制方法』

把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值. 放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃.

〖注意〗

放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤.

另,药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂. 只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用.

4

0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

『配制方法』

在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃.

5

10mol/L乙酸酰溶液

『配制方法』

把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌.

6

10%过硫酸铵溶液

『配制方法』

把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周.

7

BCIP溶液

『配制方法』

把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃.

8

2×BES缓冲盐溶液

『配制方法』

用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na 2 HPO 4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃.

9

1mol/L CaCl2溶液

『配制方法』

在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl 2 6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃.

〖注意〗

制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃.

10

2.5mol/L CaCl2溶液

『配制方法』

在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl 2 6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃.

11

1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

『配制方法』

用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃.

〖注意〗

DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理.

12

脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

『配制方法』

把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃.

13

0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

『配制方法』

在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠,在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用.

〖注意〗EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解.

14

溴化乙锭(10mg/ml溶液)

『配制方法』

在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温,

〖注意〗

溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩.

15

2×HEPES缓冲盐溶液

『配制方法』

用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na 2 PO 4、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml. 用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃.

16

IPTG溶液

『配制方法』

IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃.

17

1mol/L乙酸镁溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌.

18

1mol/L MgCl2溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解203.4g MgCl 2‘’6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用.

〖注意〗

MgCl 2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放.

19

β-巯基乙醇(BME)溶液

『配制方法』

一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃.

〖注意〗

BME或含有BME的溶液不能高压处理.

20

NBT溶液

『配制方法』

把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃.

21

酚/氯仿溶液

『配制方法』

把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TriHCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Trisl(pH7.6)液层,保存于4℃.

〖注意〗

酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服.所有操作均应在化学通风橱中进行.与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇.

22

苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液.

『配制方法』

异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃.如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L).

〖注意〗

PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之.被PMSF污染的衣物应予丢弃.PMSF在水溶液中不稳定. 应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中. PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃. pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃.

23

磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

『配制方法』

在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na 2 HPO 4和0.24g KH 2 PO 4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min. 保存于室温.

24

1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液

『配制方法』

将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃.

25

乙酸钾溶液(用于碱裂解)

『配制方法』

在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液.

26

乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

『配制方法』在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌.

27

5mol/L NaCl溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌.

28

10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

『配制方法』

在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用.

〖注意〗SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌

29

20×SSC溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌

30

20×SSPE溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH 2 PO 4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌.

31

100%三氯乙酸溶液

『配制方法』

在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA.

32

1mol/L Tris溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值. 应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌.

〖注意〗

如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris. Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,pH值大约降低0.03个单位. 例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6.

33

Tris缓冲盐溶液(TBS)

『配制方法』

在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存.

34

X-gal溶液

『配制方法』

用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液.保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃. X-gal溶液无须过滤除菌.

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