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生化试剂 >> 分子生物试剂及试剂盒 >> 核酸分离与纯化
 

全血基因组DNA提取试剂盒

Cas  号:

 
分子式:  
订货信息:
货号 品名 规格 包装 单价 货期 库存
1227173329 全血基因组DNA提取试剂盒 50T 660元 现货 3天
1227173328 全血基因组DNA提取试剂盒 100T 1155元 现货 3天
提示信息:偏远地区如新疆西藏宁夏甘肃等地可能无法运送液体,下单前请联系客服。
性 状: 试剂盒内容: 50T 100T
RNase A 1ml 1ml×2
蛋白酶K 1ml 1ml×2
红细胞裂解液 120ml 120ml×2
溶液A 15ml 25ml 
溶液B 15ml 30ml 
漂洗液 15ml 15ml×2 
洗脱液 10ml 20ml 
吸附柱 50个 100个
收集管 50个 100个
说明书 1份 1份
质量标准: 产品简介:

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤:

使用前请先在漂洗液和溶液B中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1 、样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lml-1ml 血液样品):
a 、在血液样品中加入2-3 倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200ul 溶液A,振荡至彻底混匀。
b 、  如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20u1 ,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200ul 溶液 A,振荡至彻底混匀。
2 、向悬浮液中加入 20ul (10mg/ml)  的RNase A,充分颠倒混匀,室温放置10min 。
3 、加入 20ul ( 10mg /ml )  的蛋白酶K,充分颠倒混匀,65℃水浴消化 30-60min ,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。
4 、加入 2 倍体积溶液 B(使用前请先检查是否己加入无水乙醇),充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。
5 、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
6 、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm 离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7 、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8 、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
9 、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1、本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。

2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。

3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

5、绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。

6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响;若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

贮 存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
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