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生化试剂 >> 分子生物试剂及试剂盒 >> 核酸分离与纯化
 

全血基因组DNA提取系统

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货号 品名 规格 包装 单价 货期 库存
1227173347 全血基因组DNA提取系统 50 50ml(处理血量) 660元 现货 3天
1227173346 全血基因组DNA提取系统 200 200ml(处理血量) 1584元 现货 3天
提示信息:偏远地区如新疆西藏宁夏甘肃等地可能无法运送液体,下单前请联系客服。
质量标准:          50     200
10×红细胞裂解液30ml 120ml
白细胞裂解液 30ml 120ml
蛋白沉淀液 30ml 120ml
DNA溶解液 15ml 60ml

产品说明:

       产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。少量样本也可选购我公司吸附柱型试剂盒(D1800 全血基因组DNA提取试剂盒)。

       本产品使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。

处理血液量 1ml 5ml 10ml
红细胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
白细胞裂解液 0.5ml 2.5ml  5ml
蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
异丙醇 1ml 5ml 10ml
75%乙醇 1ml 5ml 10ml
DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml

操作步骤:

     以1ml全血为例

1、样品的处理:在血液中加入3倍体积的1×红细胞裂解液(请确认已经稀释过),充分颠倒混匀,12000rpm离心1min(如为大量提取并且为大离心机,可11000转离心5min),小心吸去上清,再加入2倍体积的1×红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。

2、向沉淀中加500ul白细胞裂解液,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀。65℃水浴10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。

3、加入500ul蛋白沉淀液,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm离心5min,小心吸取上清(不要吸到下层沉淀或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,如还有沉淀物,可再次离心。

4、在上清中加入1ml异丙醇,混匀。12000rpm离心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,弃掉上清。

5、向离心管中加入1ml 75%乙醇,12000rpm离心5min,弃去上清液。可再次短暂离心用移液器去除残余上清。

6、将离心管敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,否则乙醇可能影响后续的实验如酶切、PCR等。

7、向离心管中加入100-300ul DNA溶解液,室温放置让DNA自然溶解。如果DNA难于溶解,可室温放置过夜或将离心管置于50-60℃水浴中水浴加热5min。

注意事项:

1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

3、DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260值为1相当于大约 50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

贮 存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
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