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DH5α感受态细胞

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货号 品名 规格 包装 单价 货期 库存
1227173625 DH5α感受态细胞 10×100 μl 264元 现货 3天
1227173624 DH5α感受态细胞 20×100μl 462元 现货 3天
提示信息:偏远地区如新疆西藏宁夏甘肃等地可能无法运送液体,下单前请联系客服。
质量标准: 产品简介:
本公司生产的DH5 α 感受态细胞是采用大肠杆菌DH5 α 菌株经特殊工艺制备得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达 108,-70 ℃保存3-5 个月转化效率不发生改变。 基因型:   supE44 △lacU169 (φ80 lacZ△M15 )hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特   点:  一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与pUC 载体编码的  β-半乳糖苷酶氨基端实现β 互补,可用于蓝白斑筛选。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1 、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。
2 、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30 分钟。
3 、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟,注意不要摇动离心管。
4 、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的SOC 或LB培养基,37℃ 180rpm 振荡培养1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5 、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或LB平板,37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul 左右的转化产物涂板;反之,如转化的 DNA总量较少,可取200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项: 
 1、感受态细胞应保存在-70 ℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。 
 2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。 
 3、转化时,转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 
 4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/ 铺板DNA总量。 
 5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到最低。
贮 存: -70℃保存,运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年,-70 ℃保存至少 6 个月。
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