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生化科研试剂 >> 细胞培养相关产品 >> 细胞辅助试剂
 

去内毒素质粒小量提取试剂盒
Bits to endotoxin plasmid extraction kit

Cas  号:

 
分子式:  
订货信息:
货号 品名 规格 包装 单价 货期 库存
1227182073 去内毒素质粒小量提取试剂盒 100T 688元 咨询客服 3天
1227182072 去内毒素质粒小量提取试剂盒 50T 488元 咨询客服 3天
提示信息:偏远地区如新疆西藏宁夏甘肃等地可能无法运送液体,下单前请联系客服。
性 状: 试剂盒内容:

试剂盒组成

D1140-50T

D1140-100T

RNase A

300ul

500ul

内毒素清除剂

20ml

40ml

溶液P1

10ml

20ml

溶液P2

10ml

20ml

溶液P3

10ml

20ml

溶液P4

30ml

60ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脱液

15ml

30ml

吸附柱

50个

100个

收集管

50个

100个

说明书

1份

1份


注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用前先将试剂盒中提供的RNaseA全部加入,混匀,置于 2-8℃保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

质量标准: 产品说明:

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 Solarbio公司研制的内毒素清除剂,可最大限度地除去内毒素。从1-5ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取5-15μg高纯度质粒DNA,提取率达85-90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的实验,以及其他各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

操作步骤:

1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,吸除上清(菌液浓度较低时可多次离心收集到一个离心管中)。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入200ul溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入200ul溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10 min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。注意:溶液P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5、加入上清1/5体积的冰上预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变清亮。

6、37℃水浴5min,不时振荡,溶液又变浑浊。12000rpm室温离心5min,溶液应分为两相,上层水相含质粒DNA,下层油相含内毒素。

7、将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油相,注意不要吸入油状相。重复步骤5-7三次。

8、加入600ul的溶液P4,充分混匀后加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。

9、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

10、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

11、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

12、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置2min,12000rpm离心1min。

13、为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min。

注意事项:

1. 使用前请先检查溶液P2、P3和P4是否出现混浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。

2. 洗脱缓冲液体积不应少于50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围), pH值低于7. 0会降低洗脱效率。 DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

3. 质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于质粒DNA本身的性质,清除过程可导致部分质粒DNA丢失,但内毒素却能得到最大限度清除。

4. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压处理。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、 40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。

贮 存: 常温干燥保存,复检期为一年。
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